我国是目前全球ALK检测伴随诊断平台应用最多的国家。大量的比对研究已经证实了各检测平台间存在较高的符合率，但检测实践过程中仍存在较多问题，如各检测平台结果不一致病例的处理，ALK检测结果判读中不典型病例的解决路径推荐等。针对不同检测人群、检测标本，选择恰当的检测方法，并制定、优化及遵守规范化检测流程才能获得准确的检测结果，使患者得到最/大程度的获益。
ALK基因及突变简介
ALK最早发现于间变性大细胞淋巴瘤，因此得名间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK），后来在多个肿瘤中均有发现，是强力的致癌驱动基因。
非小细胞肺癌（NSCLC）的一个重要的临床亚型是ALK基因融合，以EML4-ALK融合突变为主，EML4-ALK融合有不同的融合亚型。EML4-ALK融合的常见亚型：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7。
ALK检测的临床意义
ALK基因融合在我国NSCLC中的发生率约5.6%，其中腺癌的发生率为6.6%~ 9.6%。近年来ALK抑制剂的研发和临床应用取得了较大的突破，选择准确、快速、恰当的ALK检测方法，筛选出适用ALK抑制剂的目标人群具有重要临床意义。
▷ 伴有 ALK基因融合的不可手术晚期非小细胞肺癌患者接受 ALK抑制剂治疗， 客观缓解率和PFS 显著优于含铂化疗，并改善患者的生活质量。
▷ 伴有 ALK基因融合的非小细胞肺癌手术患者与预后差相关， 无复发生存时间（recurrence-freesurvival，RFS）较短。
ALK检测的适用人群
▷ 所有经病理学诊断为肺浸润性腺癌（包括含腺癌成分）患者均需进行ALK检测。对于晚期非小细胞肺癌患者， ALK基因检测能够有效筛选 ALK抑制剂获益人群。
▷ 经活检组织病理学诊断为非腺癌的晚期非小细胞肺癌患者推荐进行ALK检测。ALK基因融合可在肺鳞状细胞癌中检出，并且基因融合发生率可达3.7%，除此之外，部分由活检诊断为鳞状细胞癌的患者，经术后病理证实存在肺腺癌成分。
ALK靶向药物
一线治疗：可选择一代ALK抑制剂克唑替尼和二代ALK抑制剂阿来替尼，其中阿来替尼作为一线的优先推荐治疗方案。
二线治疗：二代 ALK抑制剂阿来替尼和塞瑞替尼均用于晚期 ALK阳性非小细胞肺癌患者经克唑替尼治疗耐药后的二线治疗。
ALK检测基因异常类型
初治患者进行 ALK基因异常检测时，必须检测是否存在基因易位/融合/表达，可进行ALK融合变体亚型检测及易位丰度检测。目前至少发现了20多种 EML4-ALK融合变体亚型，ALK除最常见与 EML4融合外，也可以与 TFG、KLC1、SOCS5、H1P1、TPR、BIRC6等基因融合。
ALK检测方法及判读标准
目前，我国NMPA批准了4个技术平台的 ALK基因检测伴随诊断试剂，包括 ALK Ventana-D5F3 IHC、FISH、RT-PCR、NGS检测平台。
▷ 检测结果报告格式应规范化。研究结果显示，这4个技术平台检测试剂均具有较高的灵敏度及特异度。专家组强烈推荐这4种方法均可用于ALK基因融合检测，依据临床具体情况及实验室条件进行检测方法的选择，并通过必要的性能验证或性能确认，确立检测分析前、分析中和分析后全流程的标准操作程序。
▷ 非 Ventana D5F3 抗体IHC 检测仅用于初筛。
▷ 对于非腺癌患者，在进行ALK Ventana-D5F3 IHC结果判读时需要格外谨慎，必要时可加备注进一步说明或建议使用其他技术平台进行验证。
▷ 在临床实践中要警惕 ALK Ventana IHC 结果判读中存在的一些陷阱，避免假阳性或假阴性。对于检测结果不能确定的患者，应建议使用其他技术平台进行复检。
▷ 在进行 FISH 结果判读时，对于分离信号肿瘤细胞比例在临界值附近的病例，判读应谨慎， 必要时加备注，并建议使用其他技术平台进行复检。
▷ 对于FISH信号不典型病例，应推荐其他技术平台进行复检。
▷ 基于RT-PCR只能检测已知 ALK融合基因类型，所以存在假阴性可能，对于Ct值在阈值范围附近的病例，判读应谨慎，必要时加备注，并建议使用其他技术平台进行复检。
▷ NGS在基因检测中的地位越来越高，基于捕获平台检测结果的灵敏度和特异度均很高，而且能够检测到包括已知和未知位点在内的所有ALK易位，但是其准确性可能会受捕获探针的覆盖度、标本DNA质量，以及生物信息学分析等关键因素影响，在进行ALK结果判读时，应充分掌握NGS检测平台及试剂的特点和局限性，并结合标本情况、 检测质控及测序数据等进行综合判读。
ALK检测的标本类型
检测标本优先使用肿瘤组织标本。肿瘤组织标本不满足要求时，推荐使用细胞学标本。对于少数晚期非小细胞肺癌患者无法获得组织学或细胞学样本的，专家共识建议尝试使用血液/脑脊液进行ALK检测。
ALK检测策略优化
▷ 优先应用 Ventana-D5F3 IHC进行ALK检测。
▷ 当和其他基因（如 EGFR、ROS1 等）一起检测时， 可以联合 FISH 和 RT-PCR， 或进行 RT-PCR 或NGS多基因检测。
▷ 当怀疑检测标本有质量问题时，优先应用FISH检测。
▷ 依据患者临床病理特征进行优先检测项目及检测方法的选择。
ALK检测的室内外质控
在临床操作中，行之有效的质量控制系统对于病理诊断与评估的可信度来说至关重要。
▷ 检测实验室应在临床应用前建立及优化ALK检测规范化操作流程，并进行必要的性能验证。
▷ 检测实验室应定期参加 ALK检测室间质评活动，每年至少2次。
▷ 检测实验室均应设置阴、阳性对照。
▷ 检测实验室应制定专人负责 ALK基因检测的质量控制， 定期组织人员比对、培训及数据总结和分析。
ALK抑制剂耐药机制检测
▷ 对于ALK抑制剂耐药的患者，基因检测内容应由临床医师和分子病理检测医师共同讨论决定。
▷ 耐药患者进行基因检测时， 建议优先应用NGS检测，检测内容包括获得性突变和融合突变类型等。
菁良解决方案
菁良拥有多款包含EML4-ALK Fusion基因位点的现货目录产品，适用于多种主流检测方法，可用于检测流程的质量控制和性能验证。
另外我们还可以提供EML4-ALK融合多个突变亚型以及多个ALK融合基因、多突变频率、多种形式的混合定制标准品，以满足您不同的研发和检测需求。
(现货目录产品)
